Optimization of gene expression and purification of Legionella pneumophila peptidoglycan associated lipoprotein recombinant protein

Gholipour, Abolfazl. and Moosavian, Seyed Mojtaba. and Galehdari, Hamid. and Makvandi, Manoochehr. and Mard, Seyed Ali. and RajabiMemari, Hamid. and Imani, Reza. and Soleimani, Neda. and Alvandi, Amirhooshang (2012) Optimization of gene expression and purification of Legionella pneumophila peptidoglycan associated lipoprotein recombinant protein. Journal of Shahrekord Uuniversity of Medical Sciences, 14.

[img]
Preview
Text
30.pdf

Download (361kB) | Preview
Official URL: http://journal.skums.ac.ir/article-1-1163-fa.html

Abstract

زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( PAL ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به عنوان یک آنتی ژن در تمام سویه های آن وجود دارد. لذا برای تشخیص بیماری لژیونر از طریق ادرار مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب PAL باکتری لژیونلا پنوموفیلا بوده است. روش بررسی: در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی بیان پروتئین PAL با تغییر در پارامترهای دانسیته سلولی، مدت زمان القاء، دمای رشد، غلظت ایزوپروپیل بتا دی تیوگالاکتوپیرانوزید ( IPTG ) و نوع محیط کشت مورد بررسی قرار گرفت. پس از کلونینگ، عصاره پری پلاسمی تهیه و پروتئین نوترکیب PAL با استفاده از ستون رزین نیکل نیتروتری استیک اسید ( NTA ) تخلیص گردید. در نهایت پروتئین نوترکیب PAL با آزمایش وسترن بلاتینگ بررسی شد. یافته ها: با استفاده از محیط کشت Terrific Broth ، شروع القاء در جذب نوری 6/0 (طول موج 600 نانومتر)، غلظت یک میلی مولار ماده القاء کننده IPTG ، دمای رشد 25 درجه سانتیگراد و مدت زمان 15 ساعت پس از القاء، بهترین بیان پروتئین PAL بدست آمد. پروتئین پری پلاسمی نوترکیب PAL با استفاده از ستون رزین NTA با خلوص بیش از 80 تخلیص گردید. نتایج آزمایش وسترن بلاتینگ نیز نشان داد که پروتئین نوترکیب PAL تخلیص شده به طور اختصاصی با آنتی بادی anti-His6-peroxidase شناسایی گردید. نتیجه گیری: با تخلیص پروتئین PAL به میزان بیش از 80 می توان به منظور بررسی پتانسیل آن در تشخیص بیماری لژیونر و تهیه کیت تشخیصی بر اساس الایزا از آن استفاده نمود.

Item Type: Article
Uncontrolled Keywords: بهینه سازی، بیان، تخلیص، لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان، لژیونلا پنوموفیلا
Subjects: WC Communicable Diseases > Infection.Bacterial Infections
QU Biochemistry
Divisions: Reserach Vice-Chancellar Department > Cellular and Molecular Research Center
Reserach Vice-Chancellar Department > Journal of Shahrekord University of Medical Sciences
Reserach Vice-Chancellar Department > Medical Plants Research Center
Depositing User: Users 1 not found.
Date Deposited: 29 Aug 2017 07:20
Last Modified: 11 Mar 2018 05:17
URI: http://eprints.skums.ac.ir/id/eprint/3909

Actions (login required)

View Item View Item