Construction of eukaryotic integrative vectors by insertion of the integration region attB in pSVM

Jafari-Ghahfarokhi, Hamideh. and Hojati, Zohreh. (2015) Construction of eukaryotic integrative vectors by insertion of the integration region attB in pSVM. Journal of Shahrekord Uuniversity of Medical Sciences, 16.

Full text not available from this repository.
Official URL: http://journal.skums.ac.ir/article-1-1022-fa.html

Abstract

زمینه و هدف: سالیان زیادی است که انواع مختلفی از سلول‌های تخمدان هامستر چینی (CHO) غالباً برای تولید اکثر محصولات دارویی استفاده می‌شود. تولید دائمی در این سلول‌های میزبان، یک چالش بزرگ است. هدف از این مطالعه، همسانه سازی ناحیه ی توالی اتصال در ژنوم باکتری (attB) در وکتور pSVM با استفاده از سیستم نوترکیبی phiC31 برای بقای طولانی وکتور در سلول‌های C‏HO بوده است. روش بررسی: در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی، یک جایگاه برش آنزیم محدود کننده‌ی PvuII به عنوان جایگاه کلونینگ توسط نرم افزار CLC در وکتور pSVM انتخاب که برش با این آنزیم منجر به ایجاد دو انتهای صاف در وکتور شد. دو پرایمر اختصاصی برای جداسازی و تکثیر ناحیه‌ی attB از وکتور pDrBB2 توسط نرم افزار 5 Oligo®طراحی شد. ژل الکتروفورز و آنالیز PCR بر روی قطعه تکثیرشده در جهت تایید ساختار آن انجام شد. یافته ها: ناحیه‌ی attB به طور موفق در داخل وکتور pSVM الحاق شد و توسط ژل الکتروفورز نشان داده شد. در جهت تایید ورود ژن attB در وکتور pSVMواکنش colony PCR از کلنی‌های نوترکیب انجام شد و صحت کلونینگ با مشاهده‌ی باند مربوط به ترادف attB انجام گرفت. نتیجه گیری: در این تحقیق، جایگاه attB در پلاسمیدpSVM همسانه سازی گردید. با بهره گیری از این اطلاعات و وجود جایگاه psedo-attP در کروموزوم سلول‌های CHO، می توان بعد از الحاق ژن اینترفرون انسانی در این پلاسمید، و ورود این پلاسمید و پلاسمید حاوی آنزیم اینتگراز به سلول‌های CHO برای اولین بار زمینه‌ی پایداری بیان این پروتئین را در سلول‌های CHO فراهم کرد.

Item Type: Article
Uncontrolled Keywords: CHO cells, Eukaryotic genome attachment site, Site-specific recombination, recombination, Construct, Gel electrophoresis
Subjects: WP Gynecology
QU Biochemistry > Cell biology and genetics
Divisions: Reserach Vice-Chancellar Department > Journal of Shahrekord University of Medical Sciences
Depositing User: Users 1 not found.
Date Deposited: 27 Aug 2017 07:30
Last Modified: 03 Mar 2018 08:10
URI: http://eprints.skums.ac.ir/id/eprint/3692

Actions (login required)

View Item View Item