Cloning and optimization of expression and purification of the catalytic domain of adenylate cyclase toxin from an Iranian strain of Bordetella pertussis

Hashei jezeh, H. and Bagbani -Arani, F. and Badmasti, F. and Shahcheraghi, F. (2016) Cloning and optimization of expression and purification of the catalytic domain of adenylate cyclase toxin from an Iranian strain of Bordetella pertussis. Journal of Shahrekord Uuniversity of Medical Sciences, 18.

[img]
Preview
Text
68.pdf

Download (854kB) | Preview
Official URL: http://journal.skums.ac.ir/article-1-2377-fa.html

Abstract

زمینه و هدف: توکسین آدنیلات سیکلاز (Adenylate cyclas Toxin= ACT) یکی از فاکتور های ویرولانس ترشحی و ایمونوژنیک بوردتلا پرتوسیس است که دارای یک دمین کاتالیزوری با 400 اسید آمینه، به نام AC، در ناحیه N- ترمینال خود می باشد. این دمین با تحریک غیر قابل بازگشت cAMP در سلول یوکاریوت نقش مهمی در ایجاد بیماری سیاه سرفه ایفا می کند و به عنوان یک ابزار زیست شناسی سلولی بوده و در داروهای ضد سرطانی نیز مورد استفاده قرار گرفته است؛ لذا هدف از این مطالعه، دستیابی به بیان بالایی از ناحیه AC به منظور بررسی خواص آنتی ژنیک آن در جهت استفاده از آن در واکسن، ادجونت و یا تهیه ی کیت های تشخیصی می باشد. روش بررسی: در این مطالعه تجربی، قطعه AC، توسط واکنش PCR تکثیر و در وکتور pET28a کلون و در باکتری E.coli BL21(DE3)، بیان و پس از بهینه سازی شرایط بیان، آنالیز پروتئین توسط ژل SDS PAGE و وسترن بلات انجام و سپس تخلیص آن بر روی ستون کروماتوگرافی (NI-NTA) صورت پذیرفت. یافته ها: قطعه AC با موفقیت در وکتور بیانی pET28a کلون شده و تحت سیستم بیانی القا شونده توسط IPTG با غلظت 5/0 میلی مولار، پس از 4 ساعت در دمای 37 درجه می تواند قابلیت حداکثر بیان با بازدهی 25 میلی گرم بر لیتر و خلوص 95 را داشته باشد. نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد با القای تنها 5/0 میلی مولار IPTG، می توان بیان بالای دمین کاتالیزوری پروتئین ACT، با حداکثر میزان خلوص را دارا بود که این میزان برای اکثر کاربردهای تحقیقی و تشخیصی مناسب است.

Item Type: Article
Uncontrolled Keywords: Key words: Cloning, expression optimization, adenylate cyclase catalytic domain, Bordetella pertussis. همسانه سازی، بهينه سازی بيان، دمين کاتاليتيکی آدنيالت سيکالز، بوردتال پرتوسيس.
Subjects: QU Biochemistry
Divisions: Reserach Vice-Chancellar Department > Journal of Shahrekord University of Medical Sciences
Depositing User: zahra bagheri .
Date Deposited: 19 Jul 2017 04:05
Last Modified: 19 Jul 2017 04:05
URI: http://eprints.skums.ac.ir/id/eprint/1559

Actions (login required)

View Item View Item